Obiettivo di questo studio è stato quello di sviluppare e valutare un metodo di PCR quantitativa real-time (qPCR) per la ricerca e quantificazione di Staphylococcus aureus in campioni di latte conservato in bronopol da vacche con infezioni intramammarie (IMI) subcliniche. Per stabilire una curva standard (ufc/mL) del saggio qPCR specifico per il gene nuc di Staph. aureus, sono state usate diluizioni seriali di latte artificialmente inoculato con Staph. aureus ATCC 29213 ed è stato effettuato il conteggio su piastra. Sono quindi state determinate la sensibilità , la specificità e la ripetibilità del saggio qPCR.
In tutto 60 campioni di latte, raccolti da quarti mammari asintomatici e positivi per l’isolamento di Staph. aureus, sono stati sottoposti sia al protocollo qPCR sia al conteggio su piastra di Staph. aureus e sono stati confrontati i risultati ottenuti con entrambi i metodi. Staphylococcus aureus da campioni di latte IMI subclinici conservati in bronopol non sono stati accuratamente conteggiati via qPCR rispetto alla conta su piastra dei campioni di latte crudo senza aggiunta di preservante.
Il limite di rivelazione del protocollo qPCR di Staph. aureus ATCC 29213 inoculati in latte addizionato con bronopol era 1,04×101 cfu/ml. Il protocollo qPCR può essere un saggio ad alta produttività e rapido per rivelare con accuratezza Staph. aureus IMI da campioni di latte conservato in bronopol in confronto al metodo colturale tradizionale. Tuttavia, il protocollo qPCR proposto non è invece accurato per la conta di Staph. aureus da campioni di latte con p bronopol provenienti da ghiandole mammarie infettate naturalmente.
Bibliografia
B.G. Botaro et al. Department of Animal Sciences, School of Veterinary Medicine and Animal Sciences, University of São Paulo, Brasile; Journal dairy science, 18 settembre 2013. doi: 10.3168/jds.2013-6559
