Rivelazione di L. monocytogenes da prodotti lattiero-caseari in 27 ore mediante real-time PCR
di David Rodriguez-Lazaro et al. Subdirección de Investigación y Tecnología, Instituto Tecnológico Agrario de Castilla y León (ITACyL), Valladolid, Spagna (pp. 98-105)
Lo standard microbiologico per la rivelazione di Listeria monocytogenes si basa su diversi passaggi colturali e necessita 7 giorni per la conferma finale. Viste le richieste del mercato e della distribuzione, sarebbe importante disporre di un’alternativa per la ricerca di questo patogeno. Obiettivo di questo studio è stato confrontare diverse strategie basate sulla real-time PCR (RTi-PCR) per una rivelazione rapida e sensibile in una ampia gamma di prodotti alimentari, tra cui formaggio da latte crudo di capra. Al fine di ridurre tempo e costi necessari per ottenere i risultati finali sono stati valutati quattro parametri: the initial sample size (25 e 50 g), la diluizione del campione (1:3; 1:5 e 1:10 in terreno Half Fraser), i tempi di incubazione (6, 10 e 24 ore) e l’estrazione del DNA batterico (semplice bollitura della coltura dopo lavaggio del pellet di batteri, uso della resina Chelex, e una colonna commerciale di silice). I risultati ottenuti dimostrano che l’incubazione di una diluizione 1:10 di 25 g di campione in terreno Half Fraser per 24 ore accoppiata a un’estrazione di DNA usando una colonna commerciale di silice e poi un saggio real-time PCR permettevano di rivelare fino a 2-4 ufc di L. monocytogenes per campione in meno di 27 ore in differenti tipi di alimenti. Questo metodo basato su RTi-PCR è totalmente compatibile con lo standard ISO, dando però risultati in tempi più brevi e a costi inferiori. I risultati sono stati confermati in un’ampia gamma di campioni alimentari naturalmente contaminati con almeno la stessa performance analitica del metodo di riferimento.
Bibliografia
International Journal of Food Microbiology. 1° agosto 2014, vol. 184.
doi: 10.1016/j.ijfoodmicro.2014.03.006
