Rivelare e quantificare L. monocytogenes in latte

18126Metodo di quantificazione diretta di Listeria monocytogenes in latte intero crudo mediante qPCR

di Moushumi Paul et al. Dairy and Functional Foods Research Unit e Molecular Characterization of Foodborne Pathogens Research Unit, USDA, ARS, NAA, ERRC, Wyndmoor, PA-USA (pp. 46-49)

Un metodo di PCR quantitativa (qPCR) sviluppato in precedenza per la ricerca diretta (senza arricchimento) di Escherichia coli O157:H7 è stato adattato per Listeria monocytogenes. Il protocollo di trattamento del campione è riuscito a concentrare i batteri da campioni da 10 mL di latte crudo e ridurre al minimo il problema dell’inibizione della PCR, ma la sensibilità e la riproducibilità della qPCR erano risultate basse. Sono stati testati due reagenti di estrazione e condizioni di estrazione multipla per identificare un metodo di estrazione del DNA efficiente e riproducibile. Al fine di ridurre al minimo i risultati falsi-positivi e di ottimizzare la sensibilità e la riproducibilità della rivelazione qPCR sono stati valutati due set di primer/probe a due concentrazioni e a tre temperature di annealing. Nelle condizioni selezionate, il DNA è stato estratto in modo efficiente dall’intero campione di latte in un volume di 10 μL, ed è stato poi quantificato con un saggio qPCR 5′ nucleasi della durata di 50 minuti. Il metodo ha consentito la rivelazione di 1 ufc/mL di L. monocytogenes in 10 mL di latte crudo e la quantificazione in un range da 10 a 1000 ufc/mL con una durata totale dell’esperimento inferiore a 3 ore.
Bibliografia
International Dairy Journal, feb. 2015, vol.41. doi:10.1016/j.idairyj.2014.09.008

Condividi quest’articolo
Invia il tuo commento

Per favore inserisci il tuo nome

Inserisci il tuo nome

Per favore inserisci un indirizzo e-mail valido

Inserisci un indirizzo e-mail

Per favore inserisci il tuo messaggio

Il Latte © 2017 Tutti i diritti riservati

© 2014 Tecniche Nuove Spa • Tutti i diritti riservati. Sede legale: Via Eritrea 21 - 20157 Milano.
Capitale sociale: 5.000.000 euro interamente versati. Codice fiscale, Partita Iva e Iscrizione al Registro delle Imprese di Milano: 00753480151