Metodo di quantificazione diretta di Listeria monocytogenes in latte intero crudo mediante qPCR
di Moushumi Paul et al. Dairy and Functional Foods Research Unit e Molecular Characterization of Foodborne Pathogens Research Unit, USDA, ARS, NAA, ERRC, Wyndmoor, PA-USA (pp. 46-49)
Un metodo di PCR quantitativa (qPCR) sviluppato in precedenza per la ricerca diretta (senza arricchimento) di Escherichia coli O157:H7 è stato adattato per Listeria monocytogenes. Il protocollo di trattamento del campione è riuscito a concentrare i batteri da campioni da 10 mL di latte crudo e ridurre al minimo il problema dell’inibizione della PCR, ma la sensibilità e la riproducibilità della qPCR erano risultate basse. Sono stati testati due reagenti di estrazione e condizioni di estrazione multipla per identificare un metodo di estrazione del DNA efficiente e riproducibile. Al fine di ridurre al minimo i risultati falsi-positivi e di ottimizzare la sensibilità e la riproducibilità della rivelazione qPCR sono stati valutati due set di primer/probe a due concentrazioni e a tre temperature di annealing. Nelle condizioni selezionate, il DNA è stato estratto in modo efficiente dall’intero campione di latte in un volume di 10 μL, ed è stato poi quantificato con un saggio qPCR 5′ nucleasi della durata di 50 minuti. Il metodo ha consentito la rivelazione di 1 ufc/mL di L. monocytogenes in 10 mL di latte crudo e la quantificazione in un range da 10 a 1000 ufc/mL con una durata totale dell’esperimento inferiore a 3 ore.
Bibliografia
International Dairy Journal, feb. 2015, vol.41. doi:10.1016/j.idairyj.2014.09.008
